注意事项: Buffer A1在加入RNase A后，需放在4°C保存，Buffer ER* 也需于4°C保存。其他所有试剂成分可置于常温下保存（22-25°C），本试剂盒自购买之日起可保存12个月。 高纯度质粒大提试剂盒（沉淀法）操作步骤: 1、将初摇的100 µL 加入到100 -200 mL的LB培养基（含适量***），37oC震荡培养14-16小时。 2、室温下5,000 x g离心10 min，收集菌体，将上清倒掉，并将收集管倒扣在纸巾上以除去残留在菌体表明的培养基，将上清完全去除。 3、加入 10 mL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液枪或涡流震荡充分悬浮**细胞。再向悬浮的菌液中加入0.5 mL 的Buffer ER，反转5-10次，混合均匀。 4、加入 10 mL Buffer B1, 温和地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5 min至溶液粘稠而澄清，如果有必要，持续混匀。 5、加入 3 mL Buffer C1, 立即反转多次，至溶液充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。 6、将离心管转至高速离心机，在室温下12,000 x g 离心10 min。 7、小心吸取离心后的上清液至 50 mL 离心管中（避免吸起沉淀），加入0.1倍体积的3M NaAC 或者 3M KAC和0.7-1倍体积的异丙醇，用手迅速颠倒混匀。 8、4°C 10,000~12,000 x g 离心 20 min，这时候将出现质粒DNA沉淀，小心倒去上清，沉淀上残留的上清用枪头吸干。 9、加入5 mL Buffer KB，将沉淀轻轻弹起，室温放置约5 min，4°C 10,000~12,000 x g 离心 5 min，沉淀上残留的上清用枪头吸干。 10、加入5 mL 70% 乙醇，将沉淀轻轻弹起，室温放置约5 min，4°C 10,000~12,000 x g 离心 5 min，将上清小心倒出，沉淀上残留的上清用枪头吸干，重复步骤10。 11、5,000 x g 离心 1 min，用枪头将残留的酒精吸干。 12、将离心管在空气中风干，或者置于55oC烘箱中5 min，以彻底去除残留酒精。注：不要过分干燥，否则质粒DNA沉淀不容易溶解。 13、加入1-1.5 mL Elution Buffer 或者 ddH2O ，可置于65oC水浴中溶解或用宽口吸管轻轻吹打辅助溶解。 14、DNA浓度计算如下：DNA浓度 = 50 μg/mL × OD260 × {稀释倍数} 注：纯化的质粒的OD260/OD280的比值在1.7-1.9之间，如果用水溶解，OD260/OD280会偏低，但并表示DNA纯度低，因为PH值和离子存在会影响OD比值。 高纯度质粒大提试剂盒（沉淀法）操作流程：
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