无内**质粒小量提取试剂盒

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产品名称: 无内**质粒小量提取试剂盒

产品型号: PD1212-01

产品品牌: Biomiga

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简单介绍

无内**质粒小量提取试剂盒（EndoFree plasmid mini kit ）处理5-12mL的菌液，可获得30-70µg的质粒DNA。

无内**质粒小量提取试剂盒 的详细介绍

无内**质粒小量提取试剂盒（EndoFree plasmid mini kit ）处理5-12mL的菌液，可获得30-70µg的质粒DNA。

无内**质粒小量提取试剂盒组分：

Catalog #	PD1212-01
Preps	50
ezBind Columns	50
Buffer A1	25 mL
Buffer B1	25 mL
Buffer N3	30 mL
Buffer KB	30 mL
DNA Wash Buffer*	15 mL
EndoClean Buffer	10 mL
Endofree Eluiton Buffer	10 mL
RNase A(20 mg/mL)	2.5 mg(125µL)
User Manual	1

保存条件：

RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它组分室温保存。

注意事项：
1、质粒拷贝数: 纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N3,相同体积的Wash Buffer和Endofree Elution Buffer。
2、转化菌: 若为-70^oC甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
3、切勿直接取冻存的菌种进行培养。

无内**质粒小量提取试剂盒操作简明步骤：
1、接种新鲜的单个菌落到3-12 mL的LB培养基 (含适量***)，37oC震荡培养14-16小时。
2、室温下10,000 x g离心1分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
3、加入450 µL Buffer A1 (确保已加入RNase A)，用移液器或涡流震荡确保菌体充分悬浮。
4、加入 450 µL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
5、加入100 µL Buffer N3, 立即反转5次，用手用力摇晃3-5次充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
6、将离心管转至高速离心机，在室温下13,000 rpm离心10分钟(若上清中仍有白色沉淀，可翻转后再次离心5分钟)。 7、定量吸取离心后的上清液至新的1.5mL管中，加入0.1 volume的EndoClean Buffer，混匀后冰浴10分钟，其间不时摇匀(若EndoClean Buffer粘稠难吸，可将枪头剪掉头后再吸取)。
8、室温下(冰浴取出后务必使溶液温度恢复到23oC以上，否则溶液不分层，为保证分层效果，可直接在65oC温育5分钟)13,000 rpm离心10分钟。此时溶液分为两层，上层水相含有质粒，下层红色有机相含有无内**。
9、将上层水相转移至一个新的2.0mL管中，加入450µL的Buffer N3及400µL的100% ethonal，用手用力甩3次以混匀。 10、将溶液700 µL转移至带有收集管的DNA柱中，室温下13,000rpm 离心20秒，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复此步骤至全部溶液转移至DNA柱中。
11、可选: 向DNA柱中加入 500 µL Buffer KB, 室温下13,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
12、向离心柱中加入650 µL DNA Wash Buffer (确保已加入无水乙醇)，室温下，13,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“12”。
13、将离心柱放回高速离心机中，13,000 rpm室温下开盖离心2分钟，以彻底去除残留的乙醇。
14、将离心柱转至一个新的1.5 mL离心管中，向DNA柱的正中间加入50~100 µL (体积>50 µL) 的Endofree Elution Buffer，洗脱质粒DNA。将离心管中的洗脱液再次加到DNA柱的正中间，室温放置1分钟，13,000 rpm 离心1分钟，收集洗脱液到同一个离心管中。

无内**质粒小量提取试剂盒操作流程：

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