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过滤法无内**质粒大量提取试剂盒

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产品名称: 过滤法无内**质粒大量提取试剂盒
产品型号: PD1522-01
产品品牌: Biomiga
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简单介绍

过滤法无内**质粒大量提取试剂盒EndoFree plasmid ezFlow ezFilter maxi kit处理100-200mL的菌液，可获得500-1000µg的质粒DNA。


过滤法无内**质粒大量提取试剂盒  的详细介绍

过滤法无内**质粒大量提取试剂盒EndoFree plasmid ezFlow ezFilter maxi kit处理100-200mL的菌液，可获得500-1000µg的质粒DNA。

过滤法无内**质粒大量提取试剂盒组分：

Catalog #
PD1522-00
PD1522-01
PD1522-02
Preps
2
10
25
ezBindTM Columns
2
10
25
Filter syringe (60 mL)
2
10
25
Buffer A1
22 mL
110 mL
270 mL
Buffer B1
22 mL
110 mL
270 mL
Buffer N3
8 mL
40 mL
85 mL
Buffer RET
22 mL
110 mL
270 mL
RNase A(20 mg/mL)
2.2 mg
(110 μL)
11 mg
(550 μL)
27 mg
(1.35 mL)
Endofree Elution Buffer
5 mL
25 mL
60 mL
User Manual
1
1
1

保存条件：
RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它组分室温保存。

注意事项：
1、质粒拷贝数：纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N3,100%乙醇，相同体积的70% 乙醇和Endofree Elution Buffer.
2、转化菌：若为-70oC甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。切勿直接取冻存在4℃的菌进行培养。
3、柱结合能力：1 mg
4、对富含内源核酸酶的宿主菌（endA＋）如HB101, JM101, TG1等，需去核酸酶，请使用产品PD1713。

无内**快速质粒大量提取试剂盒操作简明步骤：
1、取100 µL新鲜的菌液接种到150-200 mL (勿超过 200 mL)的LB培养基（含适量***），37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
2、加入10 mL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液器或涡流震荡确保**沉淀重新悬浮。
3、加入 10 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。 
4、加入2 mL Buffer N3, 立即反转5次，用手用力摇晃3-5次充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
5、将裂解液转移至过滤器中，放在一个50 mL的试管上静置10分钟。管中的白色絮状沉淀浮上来，对准50 mL的管向下压，使裂解液尽可能多的通过，有些裂解液可能会残留在沉淀中。注：静至10 分钟时RNase A将工作，排除RNA污染。若离心十分钟后再用过滤器过滤更有利于去除蛋白。
6、向裂解液中加入1倍体积的Buffer RET (即每20 mL裂解液加入20 mL Buffer RET) 及10 mL的100% ethonal，用手用力甩5次以混匀，需马上离心过DNA柱。
7、立即转移20 mL裂解液/收集管至带收集管的DNA柱中，室温下> 2,500 x g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。将剩余溶液转移至DNA柱中，室温下> 2,500 x g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复至所有的溶液通过DNA柱。
8、向离心柱中加入10 mL 70% 乙醇，室温下> 2,500 x g离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“9”。
9、将离心柱放回高速离心机中，室温下5,000 x g开盖离心10分钟，以彻底去除残留的乙醇。
10、将离心柱转至一个新的50 mL离心管中，向DNA柱膜的正中加入1-1.5 mL的Endofree Elution Buffer，室温放置1分钟，> 2,500 x g离心5分钟，以洗脱质粒DNA。将50 mL离心管中的洗脱液上柱再放置1分钟，> 2,500 x g离心5分钟。两次洗脱将提高得率。
过滤法无内**质粒大量提取试剂盒操作流程：

  
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