含碘代乙酰胺基团的荧光试剂(专标巯基)
碘代乙酰胺(IA)是另外一个*常用的巯基标记试剂,它通过硫醚键将生物分子和染料相连,并且硫醚键非常稳定。Dye-IA与生物分子连接须考虑以下因素的影响。
1. 溶剂: 大多数情况下,应该溶解在无水DMF中,不要用DMSO因为DMSO容易氧化IA基团。
2. 反应 pH: Dye-IA与非质子化的脂肪胺的反应受pH影响较大,一般反应 pH=7.5~9.5。对半胱氨酸通常在pH 8.5~9.5进行。
3. 反应缓冲溶液: 不能使用含有自由氨基的缓冲溶液。铵盐(例如硫酸铵和醋酸铵等常用的蛋白沉淀剂例如runngngrongye)在标记前也必须除去。因为IA基团也与氨基反应。
4. 反应温度: 一般在常温或4℃进行标记反应。
5. 碘化物对光敏感,更要严格避光。
6. 避氧:氧气会氧化巯基从而与IA形成竞争反应。
沪公网安备 31011502007621号