异硫氰酸荧光素

　　CAS#：3326-32-7

　　中文名：异硫氰酸荧光素

　　英文名：Flourescein iso-thiocyanate

　　结构式：

　　分子式：C₂₁H₁₁NO₅S

　　分子量：389.38

　　性质：

　　1. 外观：黄色粉末

　　2. 纯度：≥95% (HPLC)

　　3. 产品描述：

　　FITC能和各种抗体蛋白结合，结合后的抗体不丧失与一定抗原结合的特异性，并在碱性溶液中具有强烈的黄绿色荧光。通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行定性、定位或定量的检测。用于医学，农学和畜牧等方面，可对由地**病毒和寄生虫等所致**进行快速诊断。

　　4. FITC标记抗体流程：

　　(1) 将待交联的蛋白(浓度³1mg/mL)对交联反应液透析三次4℃，至pH=9.0。交联反应液配制方法：7.56g NaHCO₃，1.06g Na₂CO₃，7.36g NaCl，加水定容至1 L。

　　(2) 将FITC溶于DMSO中，浓度为1mg/mL。每次交联使用的FITC均应新鲜配制，避光。

　　(3) 按P:F(蛋白质:FITC)=1mg:150μg 的比例将FITC缓慢加入于抗体溶液中，边加边轻轻晃动使其与抗体混合均匀，暗处4℃反应8h。

　　(4) 加入5mol/L的NH4Cl至终浓度50mmol/L，4℃终止反应2h。

　　(5) 将交联物在PBS中透析四次以上，至透析液清亮。

　　(6) 交联物的鉴定

　　蛋白浓度(mg/mL) = [ A₂₈₀– 0.31×A₄₉₅ ] / 1.4

　　F/P比例: 3.1×A₄₉₅ / [A₂₈₀ – 0.31×A₄₉₅ ]，该值应介于2.5～6.5之间。

　　(7) FITC交联的蛋白应置于pH 7.4的磷酸盐缓冲液中，加入0.1% NaN3、1% BSA，4℃避光保存。

　　储存条件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。

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