英文名：Bis(1,3-dibutylbarbituric acid)trimethine oxonol
结构式：
分子式：C27H39N4O6
分子量：515.62
性质：
1. 外观：红色粉末
2. 纯度：≥98% (HPLC)
3. 产品描述：
DiBAC4(3)是一种检测细胞膜电位的亲脂性阴离子荧光染料，它本身无荧光，当进人细胞与胞浆内的蛋白质结合后才发出荧光。DiBAC4(3)进入细胞，细胞内荧光强度增加，即膜电位增加表示细胞去极化;反之，细胞内荧光强度降低即膜电位降低表示细胞超极化。
4. 溶解及使用方法：
可以使用DMSO、无水乙醇和纯水溶解，用DMSO溶解成10mM的母液储存，如果低浓度也可以满足要求也可用纯水溶解。
I. 用荧光显微镜测定膜电位的方法
(1)试剂
·DiBAC4(3)
·Dulbecco’s MEM (DMEM)
·FBS (fetal bovine serum)
(2)方法
1) 将消化好的细胞移至DMEM中。
2) 加入FBS，控制浓度范围在：2～15% 。
3) 加入DiBAC4(3)，控制浓度范围在：1～5 µmol/L。
4) 用荧光显微镜观察刺激后荧光强度的变化。[Ar激光(488 nm) 的激光共聚焦显微镜]，由于DiBAC4(3)的荧光会随温度变化而改变，所以必须在37℃的条件下测定。由于细胞膜的电位会变化，可以观察细胞质内的荧光强度变化。
II. 用酶标仪测定膜电位的方法
检测用缓冲液 (pH7.4; 20 mmol/L HEPES, 120 mmol/L NaCl, 2 mmol/L KCl, 2 mmol/L CaCl2, 1 mmol/L MgCl2,5 mmol/L glucose)
1) 培养细胞：在微孔板中培养细胞
2) 清洗细胞：用含5 µmol/L DiBAC4(3) 的检测用缓冲液200 µL，清洗微孔板中培养的细胞2次
3) 染色：在孔板中加入180 µL含5 µmol/L DiBAC4(3) 的检测用缓冲液，在5%CO2，37℃培养箱中孵育30分钟。
4) 测定：用荧光酶标仪观察刺激后荧光强度的变化。由于DiBAC4(3)的荧光会随温度变化而改变，所以必须在37℃的条件下测定，加入20 µL含DiBAC4(3) 的检测用缓冲液，每隔30秒测定1次荧光变化。
III. 膜电位的标准曲线
(1)原理
膜电位变化时色素的分布也随之变化，所以荧光和吸收也会变化。这种变化程度取决于色素的分子数和细胞数的比率、色素的浓度以及细胞的种类。膜电位的标准曲线是通过用电极直接测定目的细胞的膜电位，在该电位所测得的荧光和吸收强度而制得的。
(2)试剂
·Eagle-Dulbecco medium
·PBS
(3)方法
1) 用Eagle-Dulbecco medium培养细胞。
2) 取PBS中的细胞在37℃的CO2培养箱中孵育30～60分钟，然后改变孵育时间，制备不一样的CO2浓度的样品。
3) 加入DiBAC4(3)，终浓度为2 µmol/L。
4) 20分钟后，在517 nm测定各个浓度的荧光强度，并用电极直接测定此时的电位差。
5) 用荧光强度和对应的电位差来制作标准曲线。
(4)其他方法
有钾扩散电位和荧光或吸收强度比较的方法。缬氨霉素引起钾扩散电位，钾扩散电位 (V) 是按照Nernst 方程计算如下：
V= -RT/F log[K+]in/[K+]out = -59 log[K+]in/[K+]out (mV)
所以在缬氨霉素存在时，通过改变细胞外钾离子浓度和细胞内钾离子浓度，计算扩散电位，测定各个电位的荧光或吸收强度，比较后可以得到标准曲线。
储存条件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。
沪公网安备 31011502007621号
