钙荧光探针Fluo-3, AM

　　中文名：钙荧光探针Fluo-3, AM

　　英文名：1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2- amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, pentaacetoxymethyl ester

　　结构式：

　　分子式：C₅₁H₅₀Cl₂N₂O₂₃

　　分子量：1129.85

　　性质：

　　1. 外观：红色粉末

　　2. 纯度：≥90%(HPLC)

　　3. 产品描述：

　　Fluo-3, AM是*常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一。它穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3，从而被滞留在细胞内，Fluo-3若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，*大激发波长为506nm，*大发射波长为526nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右，发射波长为525～530nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。

　　4. 操作说明(for Human T cells)*

　　(1) 试剂

　　2 mM的Fluo-3, AM/DMSO(将1mg Fluo-3, AM溶于442µL DMSO)

　　Pluronic F127

　　Hanks•balanced salt solution(HBSS)

　　HEPES buffer saline(10mM HEPES，1mM Na₂HPO₄，137mM NaCl，5mM KCl，1mM CaCl₂，0.5mM MgCl₂，5mM glucose，0.1% BSA，pH 7.4)

　　(2) 操作

　　①. 向Fluo-3, AM/DMSO溶液中加入16.5mg Pluronic F127，Pluronic F127可以 防止Fluo-3, AM在HBSS中聚合并能帮助其进入细胞。

　　②. 用HBSS稀释Fluo-3, AM溶液，制备4µM的Fluo-3, AM工作液。

　　③. 将Fluo-3, AM工作液加入细胞，在37℃培养20分钟。

　　④. 加入5倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS，再继续培养40分钟。

　　⑤. 用HEPES buffer saline洗涤细胞3次，然后用HEPES buffer saline使细胞重悬浮，制成1×10⁵ cells/mL的溶液。

　　⑥. 37℃下培养10分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长506nm，发射波长526nm。

　　*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定*佳条件。以上方法仅供参考。

　　储存条件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。

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