胞内钙掩蔽BAPTA, AM

　　中文名：钙螯合剂BAPTA, AM

　　英文名：O,O'-Bis(2-aminophenyl)ethyleneglycol-N,N,N',N'-tetraacetic acid, tetraacetoxymethyl

　　ester

　　结构式：

　　分子式：C₃₄H₄₀N₂O₁₈

　　分子量：764.68

　　性质：

　　1. 外观：白色粉末

　　2. 纯度：≥95%(HPLC)

　　3. 产品描述：

　　 BAPTA, AM 是一种细胞内钙离子选择性螯合剂。它穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯

　　酶剪切形成BAPTA，从而被滞留在细胞内。BAPTA 基本的螯合单位和EDTA 类似，只是两

　　个脂肪氮被芳香氮所替代。因此，BAPTA 在生理pH 下不会被质子化。BAPTA 的pKa₃ 为5.47，

　　pKa₄ 为6.36。这个特点显示了去质子化的步骤并不包含在钙的螯合步骤中。由于不受质子的

　　干扰，它的螯合率比EGTA 高很多。

　　4.使用方法

　　(1) 溶解方法

　　将25mg BAPTA, AM 加入到 654μL 无水DMSO 中，配制50 mM stock solution。

　　* 保存stock solution 的方法和保存时间：

　　由于AM 体遇水容易分解，所以我们推荐现配现用。

　　使用无水DMSO，在冷冻的条件下，可以保存约1～2 个月。

　　(2) 使用方法

　　稀释stock solution，添加细胞。

　　稀释浓度：少的 6～8 μM，多的50 μM

　　* 由于BAPTA, AM 是非水溶性，稀释时先再添加DMSO 后，添加水溶液(特别是使用培养

　　液时)。不然的话，BAPTA, AM 的结晶有可能出来。关于添加的DMSO 的量，考虑细胞的毒

　　性，应该低于1%以下。

　　* 由于BAPTA, AM 是非水溶性，所以稀释时慢慢添加水溶液。

　　* 如果不想再添加DMSO 的话，也有添加Pluoronic F127 的方法。添加Pluoronic F127 时，

　　先添加到母液后，使用PBS 等水溶液稀释。

　　* stock solution 和PBS 等水溶液混合时，将stock solution 添加到PBS 等水溶液里。

　　例1) 10 μM，使用2 μL 50 mM BAPTA, AM stock solution

　　再添加的DMSO 量：0μL(DMSO *终浓度：0.02 %)

　　添加的水溶液的量：10 mL

　　方法：2 μL BAPTA, AM stock solution +10 mL PBS 等水溶液

　　例2) 25 μM，使用5 μL 50 mM BAPTA, AM stock solution

　　再添加的DMSO 量：95 μL(DMSO *终浓度：1%)

　　添加的水溶液的量：10 mL

　　方法：(1) 5 μL BAPTA, AM stock solution + 95 μL DMSO

　　(2) 10 mL PBS 等水溶液 + 100μL 的(1)

　　* 关于细胞的量，不同的细胞使用不同的细胞量。一般来说，Fura-2, AM 及Fluo-3, AM 一样

　　的量。

　　论文里面有如下的条件，请参考。

　　例1) 1.75×10^-4 cells/cm²，25 μM BAPTA, AM

　　培养时间：20～60 分钟

　　* 如果培养时间太长的话，很多BAPTA, AM 进入细胞内，对细胞不好(毒性高)。

　　储存条件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。

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